線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)是(shi)一種(zhong)陽(yang)離子(zi)聚合物(wu)(wu)，分(fen)子(zi)量25000，它能與核酸(suan)(suan)形(xing)成復(fu)合物(wu)(wu)，并使該(gai)復(fu)合物(wu)(wu)進入(ru)哺乳(ru)動物(wu)(wu)細(xi)胞(bao)。線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)廣(guang)適(shi)用于常見細(xi)胞(bao)系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等(deng)。該(gai)試劑(ji)即使在(zai)有(you)血清存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下(xia)，它仍然(ran)能的(de)(de)(de)(de)(de)將核酸(suan)(suan)導入(ru)細(xi)胞(bao)。78bio公司提供(gong)的(de)(de)(de)(de)(de)線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)具有(you)如下(xia)優點：優越的(de)(de)(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)效率(lv),重組(zu)蛋白的(de)(de)(de)(de)(de)高表達水(shui)平,與含血清的(de)(de)(de)(de)(de)培養基相兼容,低細(xi)胞(bao)毒性(xing),易于操作?質量控制每(mei)批次線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)均經過(guo)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)測試。將eGFP表達質粒(li)（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)轉(zhuan)(zhuan)入(ru)亞融合狀態(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)HEK-293細(xi)胞(bao)，轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)16h后，超(chao)過(guo)95%的(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)表達eGFP。哪家有(you)GMP等(deng)級的(de)(de)(de)(de)(de)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)？RNAPEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)(ran)試劑(ji)使用注意事項

對大(da)多(duo)(duo)數細胞(bao)來而言，每1μgDNA使用(yong)(yong)3.0μLPEIMAX轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑都能(neng)獲得(de)較高轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)(xiao)率(lv)(lv)。使用(yong)(yong)者(zhe)也可嘗試(shi)(shi)(shi)每1μgDNA使用(yong)(yong)1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑進(jin)行優化(hua)。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產(chan)的化(hua)合物產(chan)品(pin)(pin)(pin)，每批(pi)產(chan)品(pin)(pin)(pin)出廠前(qian)都經過嚴格(ge)的檢測(ce),保(bao)證(zheng)每批(pi)產(chan)品(pin)(pin)(pin)都100%合格(ge)、穩定且品(pin)(pin)(pin)質高,但由于(yu)作為轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑使用(yong)(yong)過程(cheng)中有很多(duo)(duo)實驗室(shi)因(yin)素(su)(配置方(fang)法，PH,水(shui)純度(du),稱量的準度(du),dnaRNA純度(du),細胞(bao)狀態，細胞(bao)品(pin)(pin)(pin)系…)造成溶(rong)解(jie)(jie)出現問(wen)(wen)題(ti)或者(zhe)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)(xiao)率(lv)(lv)出現差異,所(suo)以廠家只受理該產(chan)品(pin)(pin)(pin)純度(du)，分子量及重(zhong)量缺失破損等相關(guan)投訴(su)，針(zhen)對極個別客戶溶(rong)解(jie)(jie)問(wen)(wen)題(ti)和轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)(xiao)率(lv)(lv)問(wen)(wen)題(ti)我們能(neng)友善解(jie)(jie)決。更(geng)多(duo)(duo)關(guan)于(yu)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑相關(guan)產(chan)品(pin)(pin)(pin)問(wen)(wen)題(ti)，歡迎咨詢上海曼博生物！浙江(jiang)高性價(jia)比PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑哪里有賣GMP等級的PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)(shi)劑？

瞬時(shi)(shi)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)方法(fa)：1.接種(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)：轉(zhuan)(zhuan)染(ran)前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消(xiao)化細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)并計數（不建議用胰酶）。調整細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)濃度，將細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)鋪入細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)(de)器皿，每個孔置(zhi)入的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)應能使(shi)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)時(shi)(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)匯合(he)(he)度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)：DNA、PEI試劑和稀釋(shi)劑在(zai)進行(xing)以下步驟前需(xu)先使(shi)其(qi)升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其(qi)他適(shi)合(he)(he)的(de)(de)(de)無(wu)蛋白(bai)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)適(shi)量(liang)DNA。用同樣(yang)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)PEI試劑。每1μgDNA需(xu)用1.5-5μL線性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑。一邊輕(qing)輕(qing)渦旋裝有DNA溶(rong)液的(de)(de)(de)試管(guan)(guan)(guan)，一邊將稀釋(shi)的(de)(de)(de)線性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑滴(di)加(jia)(jia)(jia)至試管(guan)(guan)(guan)中（注意：請(qing)(qing)勿顛倒添加(jia)(jia)(jia)順序）。充(chong)分(fen)(fen)混勻(yun)后(hou)，室溫靜置(zhi)10~25min以形成DNA-PEI復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)。當溶(rong)液體積(ji)較大時(shi)(shi)，請(qing)(qing)用圓底聚丙烯管(guan)(guan)(guan)，例(li)如(ru)NEST5mL/14mL離(li)心管(guan)(guan)(guan)。3.轉(zhuan)(zhuan)染(ran)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)：直接向每個孔中加(jia)(jia)(jia)入DNA-PEI復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)并輕(qing)輕(qing)渦旋培(pei)養(yang)(yang)板(ban)/培(pei)養(yang)(yang)皿。在(zai)無(wu)血清條件下轉(zhuan)(zhuan)染(ran)時(shi)(shi)，去(qu)除生長培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，替(ti)換成無(wu)血清培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，然后(hou)滴(di)DNA-PEI復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)1.5h后(hou)，添加(jia)(jia)(jia)?體積(ji)的(de)(de)(de)包含30%血清的(de)(de)(de)生長培(pei)養(yang)(yang)基(ji)。4.孵(fu)育細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和分(fen)(fen)析結果：在(zai)CO2培(pei)養(yang)(yang)箱中37℃下孵(fu)育細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)至可(ke)以分(fen)(fen)析檢測(ce)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)后(hou)5h即可(ke)檢測(ce)到轉(zhuan)(zhuan)入基(ji)因的(de)(de)(de)表達。請(qing)(qing)自(zi)行(xing)確(que)定適(shi)合(he)(he)檢測(ce)時(shi)(shi)間。

線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)是(shi)一種陽(yang)離(li)子聚(ju)合(he)(he)物(wu)，分子量25000，它(ta)能與核(he)酸形成復(fu)合(he)(he)物(wu)，并使該(gai)復(fu)合(he)(he)物(wu)進入(ru)哺乳(ru)動物(wu)細胞(bao)。線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)廣適(shi)用(yong)于(yu)(yu)常見細胞(bao)系，如(ru)HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該(gai)試(shi)劑(ji)即使在(zai)有血清(qing)(qing)存在(zai)的(de)(de)情況(kuang)下，它(ta)仍然能的(de)(de)將(jiang)核(he)酸導入(ru)細胞(bao)。78bio公司(si)提供的(de)(de)線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)具有如(ru)下優(you)點：優(you)越的(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)效率(lv),重組(zu)蛋(dan)白的(de)(de)高(gao)表達水平,與含血清(qing)(qing)的(de)(de)培養基相(xiang)(xiang)兼(jian)容,低細胞(bao)毒性,易(yi)于(yu)(yu)操作?質量控制每(mei)批次線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)均經過轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)測試(shi)。將(jiang)eGFP表達質粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用(yong)EndoFectinTM-Plus轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)入(ru)亞(ya)融(rong)合(he)(he)狀態的(de)(de)HEK-293細胞(bao)，轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)16h后(hou)，超過95%的(de)(de)細胞(bao)表達eGFP。更多關于(yu)(yu)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)相(xiang)(xiang)關的(de)(de)產品信息，歡迎(ying)咨(zi)詢上海曼(man)博生物(wu)！用(yong)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)時出現沉(chen)淀是(shi)什么原因？

注意事(shi)項(xiang)質(zhi)粒(li)質(zhi)量：請務必使(shi)用(yong)高(gao)質(zhi)量轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染級無內質(zhi)粒(li)（推薦使(shi)用(yong)QIAGEN或(huo)者MN公(gong)(gong)司去內質(zhi)粒(li)提取試劑(ji)盒）。通(tong)過(guo)260nm光吸收(shou)測(ce)定DNA濃度(du)，260nm/280nm比值(zhi)確定DNA純度(du)（比值(zhi)應該(gai)在(zai)1.8~2.0的(de)(de)(de)范圍之(zhi)內）。如有(you)可能，請通(tong)過(guo)瓊脂糖凝膠電泳檢測(ce)質(zhi)粒(li)的(de)(de)(de)完(wan)整性。細胞(bao)(bao)條件：使(shi)用(yong)適當保存和經(jing)常傳代的(de)(de)(de)健康細胞(bao)(bao)。確保培(pei)養基沒有(you)被(bei)細菌(jun)、或(huo)支原(yuan)體污染。如果細胞(bao)(bao)是(shi)(shi)近期復蘇的(de)(de)(de)液氮凍存細胞(bao)(bao)，請在(zai)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染前至少傳代兩次(ci)。建(jian)議使(shi)用(yong)GIBCO或(huo)者78bio公(gong)(gong)司血清培(pei)養細胞(bao)(bao)。PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染試劑(ji)對復合物(wu)孵化的(de)(de)(de)時間(jian)是(shi)(shi)有(you)要(yao)求(qiu)的(de)(de)(de)，一(yi)般建(jian)議5~20分(fen)鐘之(zhi)間(jian)。國產(chan)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染試劑(ji)好(hao)用(yong)么(me)

如何辨(bian)別假(jia)的PEI轉(zhuan)染(ran)試劑？RNAPEI轉(zhuan)染(ran)試劑使用注意(yi)事(shi)項(xiang)

穩定轉染方法：

1.接種細(xi)胞(bao)：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消(xiao)化細(xi)胞(bao)并計數（不建議用胰酶）。調整細(xi)胞(bao)濃度(du)(du)，將細(xi)胞(bao)鋪入細(xi)胞(bao)培養的(de)器皿，每個(ge)孔置(zhi)入的(de)細(xi)胞(bao)量應能使轉染時細(xi)胞(bao)匯合度(du)(du)達(da)到70~80%。

2.準備DNA-PEI復合(he)物：DNA、PEI試(shi)劑和(he)(he)稀(xi)釋(shi)劑在(zai)進行(xing)以下步(bu)驟(zou)前需(xu)先使其升至室溫。依據表1所示，用(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或(huo)其他適合(he)的(de)(de)無蛋(dan)白培(pei)養基稀(xi)釋(shi)適量(liang)DNA。用(yong)同樣的(de)(de)培(pei)養基稀(xi)釋(shi)PEI試(shi)劑。每1μgDNA需(xu)用(yong)1.5-5μL線性PEI轉染(ran)試(shi)劑(這個需(xu)要客戶自行(xing)摸索配(pei)比(bi)，每一(yi)批轉染(ran)試(shi)劑和(he)(he)每一(yi)批DNA比(bi)例可能會稍有(you)不(bu)同）。一(yi)邊(bian)輕輕渦(wo)旋裝有(you)DNA溶(rong)液(ye)的(de)(de)試(shi)管(guan)(guan)，一(yi)邊(bian)將稀(xi)釋(shi)的(de)(de)線性PEI轉染(ran)試(shi)劑滴加至試(shi)管(guan)(guan)中(zhong)（注意：請勿顛倒添加順序）。充分(fen)混(hun)勻后(hou)，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合(he)物。當溶(rong)液(ye)體積較(jiao)大(da)時，請用(yong)圓(yuan)底聚丙烯(xi)管(guan)(guan)，例如NEST5mL/14mL離(li)心(xin)管(guan)(guan)。

3.轉(zhuan)染(ran)細胞：直(zhi)接向每個孔中加(jia)入DNA-PEI復合物(wu)(wu)并輕(qing)輕(qing)渦(wo)旋(xuan)培養(yang)(yang)板/培養(yang)(yang)皿。在(zai)無血(xue)(xue)清條(tiao)件下轉(zhuan)染(ran)時，去除生(sheng)(sheng)長培養(yang)(yang)基(ji)，替換成無血(xue)(xue)清培養(yang)(yang)基(ji)，然后(hou)(hou)滴DNA-PEI復合物(wu)(wu)。轉(zhuan)染(ran)1.5h后(hou)(hou)，添加(jia)?體(ti)積的(de)包含(han)30%血(xue)(xue)清的(de)生(sheng)(sheng)長培養(yang)(yang)基(ji)。

4.孵育細胞和分析結果：在(zai)CO2培養箱中37℃下(xia)孵育細胞至可(ke)以(yi)分析檢測。轉(zhuan)染(ran)后5h即可(ke)檢測到轉(zhuan)入基因的表達。

歡迎咨(zi)詢PEI產品！RNAPEI轉(zhuan)染試(shi)劑使用(yong)注(zhu)意事項

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